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    亮發光桿菌的分離、培養

    點擊次數:726  更新時間:2017-09-14

    亮發光桿菌實驗方法   
    1、銅柱系統除氧
    2、預還原培養基及稀釋液的制備
          制作預還原培養基及稀釋液時,先將配置好的培養基和稀釋液煮沸驅氧,而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中,一般瓊脂培養基裝4.5~5.0mL,稀釋液裝9mL,并插入通N2氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚的看到培養基內加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍到紅zui后變成無色,說明試管內已成為無氧狀態,然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋,滅菌備用。
    3、分離
    (1)編號
          取五支無菌水試管,分別用記號筆標明10-1、10-2……10-5。
    (2)稀釋
          在無菌條件下,用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品,加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中,用震蕩器將其混合均勻,制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中,制成10-2稀釋液。依此進行10倍系列稀釋,至10-7,制成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進行滾管計數。
    (3)滾管分離
    1)滾管
          將無氧無菌的瓊脂培養基在沸水浴中溶化,置46-50℃恒溫的水浴中,待用,用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個稀釋度各0 .1mL,分別注入待用的試管中,然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動,帶菌的溶化瓊脂在試管內壁會即刻形成凝固層。
    2)分離
          生成的亮發光桿菌落需挑取出來,鏡檢其形態及純度。如尚未獲得純培養物,需再次稀釋滾管,并再次挑取菌落,直至獲得純培養物為止。待挑取的單菌落預先在放大鏡下觀察確定,做好標記。然后將培養基試管固定于適當的支架上,打開試管膠塞,同時迅速將氣流適當、火焰滅過菌的氮氣長針頭插入管內。同時,另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準備好的彎頭毛細管小心插入固體培養基內,找準待挑菌落,輕輕吸取,轉移至液體試管內,加塞。37℃培養。培養24h或待培養液混濁后檢查已分離培養物的純度。
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    亮發光桿菌

     

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